WANG Ruipu,CUI Lei,ZHANG Xiaoying,et al.Establishment of Two-dimensional Electrophoresis System of Grape Seed[J].Northern Horticulture,2015,39(20):86-91.[doi:10.11937/bfyy.201520021]
葡萄种子蛋白质双向电泳体系的建立
- Title:
- Establishment of Two-dimensional Electrophoresis System of Grape Seed
- Keywords:
- grape; seed; proteomics; Two-dimensional electrophoresis (2-DE)
- 文献标志码:
- A
- 摘要:
- 为了进行葡萄种子蛋白质组学的研究，以葡萄种子为试材，通过对比粗蛋白质不同溶解方法、IPG胶条、上样量、等电聚焦参数以及不同SDS-PAGE分离胶浓度对双向电泳效果的影响，建立了适合葡萄种子的双向电泳体系。结果表明：TCA-丙酮提取蛋白质经酚抽提后蛋白质溶解快、杂质少、浓度高，筛选获得17 cm pH 5~8的IPG胶条，上样量600 μg，第一向的聚焦步骤达到80 000 Vh以及11% 的SDS-PAGE分离胶的双向电泳参数，蛋白质分离效果好。所建立的双向电泳体系，适用于不同葡萄品种的种子蛋白质分离。
- Abstract:
- Taking the grape seeds as material，in order to establish a two-dimensional electrophoresis（2-DE）system for proteomic analysis of grape seed，we compared the parameters including different protein extraction methods，the pH value gradient of IPG strip，sample loading，isoelectric focusing conditions and different SDS-PAGE separation gel.The results showed that the protein was dissolved quickly，more pure and in high concentration after extracting by TCA-acetone/phenol method.The system with 17 cm pH 5-8 IPG strips，loading 600 μg samples，focusing to 80 000 Vh and seperating by 11% SDS-PAGE gel showed good two-dimensional electrophoresis maps.The system was also suitable for different grape seed protein.
参考文献/References:
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备注/Memo
第一作者简介：王瑞璞（1989-），女，河南郑州人，硕士，研究方向为植物发育生物学。E-mail：wrp52565@126.com.责任作者：李琰（1971-），女，河南洛阳人，博士，副教授，研究方向为植物学和药用植物开发利用。E-mail：ly2659@163.com.基金项目：国家自然科学基金资助项目（31372023）；国家现代农业产业技术体系建设专项基金资助项目（CARS-30-yz-7）。