CUI Lijuan,LI Jie,LI Xinpei,et al.Optimization of Genome Extraction From Cynanchum atratum Bge[J].Northern Horticulture,2023,(21):109-115.[doi:10.11937/bfyy.20231420]
直立白薇基因组DNA提取条件的优化
- Title:
- Optimization of Genome Extraction From Cynanchum atratum Bge
- 文章编号:
- 1001-0009(2023)21-0109-07
- 分类号:
- R 284
- 文献标志码:
- A
- 摘要:
- 以新鲜直立白薇叶片为试材,采用DNA试剂盒提取方法,研究了DNA提取过程中琼脂糖凝胶浓度、样品加样量、洗脱液用量及乙醇浓度4个因素对直立白薇基因组DNA提取效果的影响,以期获得最适宜直立白薇基因组DNA的提取方法。结果表明:琼脂糖凝胶浓度为0.8%,点样量为13 μL,同时以80%乙醇沉淀,洗脱缓冲液用量为100 μL时电泳条带最为清晰明亮、不拖尾,为直立白薇基因组DNA最优提取方法。综上,基于试剂盒方法进行提取优化,获得高纯度直立白薇DNA,为直立白薇分子生物学及遗传学的研究奠定基础,为保证正品直立白薇药材资源开发和利用提供参考依据。
- Abstract:
- The fresh leaves of Cynanchum atratum were used as experimental materials,and the DNA kit extraction method was used to study the effects of agarose gel concentration,sample volume,eluent volume and ethanol concentration on the extraction of genomic DNA from Cynanchum atratum,in order to obtain the most suitable extraction method of genomic DNA from Cynanchi atratum.The results showed that when the concentration of agarose gel was 0.8%,the amount of sample was 13 μL,80% ethanol was used for precipitation,and the amount of elution buffer was 100 μL,the electrophoresis band was the most clear and bright without tailing,which was the optimal method for genomic DNA extraction of Cynanchum atratum.In summary based on the kit method,the high purity of Cynanchum atratum DNA was obtained,which laid the foundation for the study of molecular biology and genetics of Cynanchum atratum,and provided reference for the development and utilization of authentic Cynanchi atratum medicinal resources.
参考文献/References:
[1]边宝林,王宏洁,司南,等.白薇化学成分的研究[J].中草药,2005,36(7):990-991.[2]孙瑜,田树成,刘德军,等.中药白薇化学成分研究[J].中国药业,2019,28(7):9-11.[3]江苏新医学院.中药大辞典.上册[M].天津:天津科技出版社,1986.[4]王世静.中药材传统鉴别技术研究进展[J].光明中医,2021,36(10):1733-1734.[5]袁联华,原嘉文,杨裕忠,等.中药饮片传统鉴别与现代鉴别方法的效果比较分析[J].北方药学,2020,17(7):192-193.[6]王丽,赵锐,张秋芳.DNA条形码分子鉴定技术在中药材鉴定中的应用[J].食品与药品,2022,24(4):388-392.[7]杨宁,白雪,刘效瑞,等.几种分子标记技术的比较及其在中药材鉴定中的应用[J].生物学通报,2011,46(8):1-5.[8]毛帅,刘朝奇,向婷婷,等.基于DNA水平的中国药用植物分子鉴定方法[J].中国实验方剂学杂志,2014,20(5):238-242.[9]崔光红,唐晓晶,黄璐琦.含淀粉及多糖类中药材DNA的提取方法研究[J].中国中药杂志,2006,31(16):18.[10]常晶茹,姚萱航,张雪薇,等.黄芪属植物DNA条形码与聚类分析的研究[J].中草药,2022,53(22):7201-7206.[11]赵日杂,张英秀,王君军,等.基于DNA条形码鉴别缘毛紫菀及狭苞紫菀[J].中草药,2022,53(19):6167-6173.[12]王玉清,徐凌川.白薇分子鉴定方法研究[J].时珍国医国药,2022,33(7):1652-1654.[13]罗焜,马培,姚辉,等.中药DNA条形码鉴定中的DNA提取方法研究[J].世界科学技术(中医药现代化),2012,14(2):1433-1439.[14]梁玉琴,李芳东,傅建敏,等.柿属植物基因组DNA提取方法比较[J].中南林业科技大学学报,2012,32(4):170-173.[15]张平,夏东升,蔡亚君,等.多种方法提取苎麻组织基因组DNA的质量比较[J].湖北农业科学,2014,53(11):2682-2685.[16]王晓丹,吕慧颖,张敬,等.以PCR为目的的大豆叶片DNA提取方法的比较研究[J].分子植物育种,2004,2(6):891-894.[17]曹文波,郑璐璐,谢文海.一种提取植物基因组DNA的方法:改良尿素法[J].华中师范大学学报(自然科学版),2008,42(3):448-451.[18]张明月,刘晓松,常建华,等.羊肺炎支原体基因组DNA几种提取方法的比较[J].内蒙古农业大学学报(自然科学版),2012,33(3):9-12.[19]杨坤,吴学龙,朗春秀,等.优化反向PCR法分离转基因油菜外源T-DNA侧翼序列的研究(英文)[J].Agricultural Science & Technology,2010,11(2):65-68,139.[20]赵喆.基于DNA条形码的植物快速分子鉴定实验技术研究[D].北京:北京林业大学,2020.[21]程文,夏正俊,冯献忠,等.一种快速、无损大豆种子DNA提取方法的建立和应用[J].植物学报,2016,51(1):68-73.[22]黄凤兰,郭志强,孟凡娟,等.试剂盒法提取蓖麻基因组DNA的条件优化[J].内蒙古民族大学学报(自然科学版),2010,25(1):29-33.[23]张馨元,赵超越,侯和胜.四种中药材DNA提取方法的比较[J].中国生化药物杂志,2015,35(7):17-21.[24]宋佳.东北红豆杉的谱系地理结构研究[D].北京:北京林业大学,2017.[25]陈士林,姚辉,宋经元,等.基于DNA barcoding(条形码)技术的中药材鉴定[J].世界科学技术-中医药现代化,2007(3):7-12.[26]廖绪红,沙秀芬,廖雪梅,等.藁本属药用植物分子生物学研究进展[J].北方园艺,2021(12):133-139.[27]廖真,林占熺,徐志文,等.巴布亚新几内亚野生香菇的鉴定及生物学特性[J].北方园艺,2021(14):143-152.[28]胡琼,茹巧美.植物和食物源基因组DNA提取及应用研究进展[J].黑龙江农业科学,2022(7):110-116.[29]杜金洋,芦春雪,韩金,等.中药现代化分子鉴定技术研究进展[J].山东化工,2022,51(11):71-73,76.[30]刘晓莹,卢昌华,李嘉惠,等.广藿香AFLP反应体系的优化及引物筛选[J].北方园艺,2020(11):117-123.
备注/Memo
第一作者简介:崔立娟(1999-),女,硕士研究生,研究方向为中药鉴定。E-mail:juanNA802313@163.com.责任作者:徐凌川(1962-),男,本科,教授,现主要从事生药鉴定与品质评价及生药和中药质量控制与资源开发等研究工作。E-mail:xulingchuan518@sina.com.基金项目:国家中医药管理局全国中药资源普查资助项目(GZY-KJS-2018-004);山东省重点产业关键技术资助项目(2016CYJS08A01-8);山东省中医药管理局中医药科技发展计划资助项目(2019-0976)。收稿日期:2023-04-24