QIN Fang,SHI Yancai,ZOU Rong,et al.Establishment and Optimalization of ISSR-PCR Reaction System on Rhododendron molle[J].Northern Horticulture,2020,44(21):96-102.[doi:10.11937/bfyy.20194897]
闹羊花ISSR-PCR反应体系建立及优化
- Title:
- Establishment and Optimalization of ISSR-PCR Reaction System on Rhododendron molle
- 关键词:
- 闹羊花; ISSR-PCR反应体系; 正交实验; 单因素试验
- 文献标志码:
- A
- 摘要:
- 以闹羊花的叶片为试材，采用正交实验和单因素试验2种方法对闹羊花ISSR-PCR反应体系的主要影响因子（Taq DNA聚合酶、dNTPs、模板DNA、引物、Mg2+以及反应程序）进行了优化组合。以期为深入开展闹羊花种质资源遗传多样性的研究提供参考依据。结果表明：闹羊花ISSR-PCR反应体系中各组分的Taq DNA聚合酶用量为2.5 U，引物浓度为0.2 μmol·L-1，Mg2+浓度为1.0 mmol·L-1，dNTPs浓度为0.4 mmol·L-1，模板DNA浓度为60 ng，10×Buffer为2 μL，以纯水补足反应总体积至20 μL。扩增程序为94 ℃条件下预变性5 min；94 ℃条件下变性30 s，49.6 ℃条件下退火30 s，72 ℃条件下延伸30 s，以上3个步骤循环45次，最后72 ℃延伸5 min。
- Abstract:
- The leaves of Rhododendron molle were used as the test materials.Through orthogonal design and single factor test,to establish ISSR-PCR program for Rhododendron molle.Five factors were tested by orthogonal design and single factor test,Mg2+ concentration,dNTP concentration,Taq DNA polymerase concentration,primer concentration,template DNA concentration and reaction procedure.The results showed that,the Taq DNA polymerase amount was 2.5 U,the primer concentration was 0.2 μmol·L-1,the Mg2+ concentration was 1.0 mmol·L-1,the dNTPs concentration was 0.4 mmol·L-1,and the DNA concentration was 60 ng.Amplification procedure:pre-denaturation for 5 minutes at 94 ℃;denaturation for 30 seconds at 94 ℃,annealing for 30 seconds at 49.6 ℃,extension for 30 seconds at 72 ℃,45 cycles of the above three steps,and extension for 5 minutes at 72 ℃.The establishment of this optimization system could be helpful for further research on the genetic diversity of germplasm resources of Rhododendron molle.
参考文献/References:
[1]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M].北京:科学出版社，1994.[2]CHENG X G,XIE J J,HU M Y,et al.Induction of intracellular Ca2+ and pH changes in Sf9 insect cells by rhodojaponin-III,a natural botanic insecticide isolatedfrom Rhododendron molle[J].Molecules (Basel,Switzerland),2011,16(4):3179-3196.[3]程东美,张志祥,胡美英.闹羊花素Ⅲ对斜纹夜蛾细胞系的活性及作用机理[J].昆虫学报,2007(10):1022-1026.[4]姚禹民,房鑫,李俊,等.羊踯躅二萜类成分和各极性部位的体内外抗炎活性研究[J].上海中医药大学学报,2019,33(4):84-88.[5]马强,房鑫,李俊,等.羊踯躅的化学成分研究[J].中草药,2018,49(5):1013-1018.[6]周媛,毛静,童俊,等.杜鹃种子形态特征与萌发特性研究[J].北方园艺,2015(18):84-87.[7]董丽敏,戴亮芳,白李唯丹,等.濒危羊踯躅子代幼苗遗传多样性的SSR分析[J].西北植物学报,2019,39(4):613-619.[8]张文龙,龙敏,樊伟,等.中药苦参种质资源的遗传多样性的ISSR-PAGE分析[J].时珍国医国药,2019,30(5):1138-1140.[9]王刚,曹佩,韦学敏,等.分子标记技术在药用植物种质资源研究中的应用[J].中国现代中药,2019,21(11):1435-1444.[10]杨正久,钱静,梁大敏,等.利用ISSR及代谢产物标记检测贵州金钱草遗传多样性[J].中国医院药学杂志,2019,39(19):1940-1945.[11]李璐,董诚明,朱畇昊,等.基于ISSR的连翘遗传多样性研究[J].中草药,2019,50(15):3673-3680.[12]孙杰,徐素峰,周玉亮,等.30个葡萄品种的ISSR遗传多样性分析[J].分子植物育种,2019,17(20):6867-6871.[13]马丽,王庆军,罗华,等.枣庄石榴种质资源遗传多样性的ISSR分析[J].北方园艺,2018(24):35-40.[14]何正文,刘运生,陈立华,等.正交设计直观分析法优化PCR条件[J].湖南医科大学学报,1998(4):76-77.[15]王心迪,黄如葵,冯诚诚,等.正交设计直观分析法优化苦瓜SSR-PCR反应体系[J].北方园艺,2016(10):99-103.
相似文献/References:
[1]王楠,王锦,李宗艳,等.铁线莲园艺品种ISSR-PCR反应体系优化与引物筛选[J].北方园艺,2016,40(01):80.[doi:10.11937/bfyy.201601021]
WANG Nan,WANG Jin,LI Zongyan,et al.Optimization of ISSR-PCR System and Selection of Primers for Horticultural Varieties of Clematis[J].Northern Horticulture,2016,40(21):80.[doi:10.11937/bfyy.201601021]
备注/Memo
第一作者简介：覃芳（1995-），女，硕士研究生，研究方向为药用植物良种选育及栽培。E-mail:14796246369@163.com.责任作者：史艳财（1984-），男，博士，副研究员，现主要从事药用植物良种选育及栽培技术等研究工作。E-mail:shiyancainan@163.com.基金项目：2019年广东省科技专项资金资助项目（2019B020201）；广西植物研究所基本业务费资助项目（19004）。收稿日期：2019-12-27