XIA Bolin,GAO Fei,WEI Shanjun,et al.Constructing of Expressing Vector and Identifying of Binding Activity of AmDREB2.1 in Ammopiptanthus mongolicus[J].Northern Horticulture,2017,41(01):95-100.[doi:10.11937/bfyy.201701022]
蒙古沙冬青AmDREB 2.1表达载体构建及其结合活性鉴定
- Title:
- Constructing of Expressing Vector and Identifying of Binding Activity of AmDREB2.1 in Ammopiptanthus mongolicus
- 关键词:
- 蒙古沙冬青; AmDREB2.1; 植物表达载体; 酵母单杂交载体; 结合活性
- Keywords:
- Ammopiptanthus mongolicus; AmDREB2.1; plant expression vector; yeast one-hybrid vector; binding activity
- 文献标志码:
- A
- 摘要:
- 以蒙古沙冬青为试材，以AmDREB2.1为研究对象，采用构建植物表达载体和叶盘法进行了AmDREB2.1转烟草研究，采用Gateway和酵母单杂交技术研究了AmDREB2.1转录因子的结合活性。结果表明：以BamH I 和Sac I酶切位点成功构建了pPZP212-AmDREB 2.1表达载体，通过叶盘法获得了T0转AmDREB2.1烟草株系。成功构建了pDEST22-AmDREB2.1的酵母单杂交载体，分别转化YH4271-mDRE和YH4271-wDRE 2种酵母菌株，在Trp- His- Ade- 三缺培养基（3-AT浓度为0、20 mmol?L-1）上筛选获得了阳性克隆，检测其β-半乳糖苷酶活性为阳性，显示AmDREB2.1具有转录因子的结合活性。
- Abstract:
- Ammopiptanthus mongolicus was used as material，the AmDREB2.1 transformation to tobacco was investigated via expression vector construction and leaf disc method，and the binding activity of AmDREB2.1 was studied with Gateway technique and the yeast one-hybrid assay.The results showed that pPZP212-AmDREB2.1 expression vector was constructed with BamH I and Sac I，and then successfully transformed to the tobacco.The pDEST22-AmDREB2.1，the yeast one-hybrid vector，was constructed，and then were converted into two yeast strains YH4271-mDRE and YH4271-wDRE，respectively.Positive clones were obtained with the ‘Trp-His-Ade-’selective media (the concentration of 3-AT was 0 mmol?L-1 and 20 mmol?L-1)，and the activity of β-galactosidase was detected and it indicated that AmDREB2.1 could bind to DRE cis-element.
参考文献/References:
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相似文献/References:
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XIA Bolin,XING Yide,GAO Fei,et al.Expression Analysis and Construction of Plant Expression Vector of AmWRKY53 in Ammopiptanthus mongolicus[J].Northern Horticulture,2018,42(01):1.[doi:10.11937/bfyy.20173341]
备注/Memo
第一作者简介：夏波林（1990-），男，湖北来凤人，硕士研究生，研究方向为植物抗逆分子生物学。E-mail：xiabolin@muc.edu.cn.责任作者：周宜君（1964-），女，福建福州人，博士，教授，现主要从事植物抗逆分子生物学等研究工作。E-mail：zhouyijun@muc.edu.cn.基金项目：国家自然科学基金资助项目(31370356)；中央民族大学一流大学一流学科资助项目(YLDX01013，2015MDTD08C)。