LI Honglian,WANG Qiang,YAN Xingkai,et al.Establishment for SSR Reaction System of Pyrus ussuriensis Maxim and Its Stability Assessment[J].Northern Horticulture,2015,39(23):104-107.[doi:10.11937/bfyy.201523029]
山梨SSR反应体系的建立及其稳定性验证
- Title:
- Establishment for SSR Reaction System of Pyrus ussuriensis Maxim and Its Stability Assessment
- 文献标志码:
- A
- 摘要:
- 以山梨为试材，提取基因组DNA，运用5因素5水平正交实验设计,对SSR反应体系中的DNA模板、Mg2+、Taq〖KG-*4〗酶、dNTPs和引物用量进行优化试验,确立适宜的SSR反应体系。结果表明：20 μL反应体系中，模板DNA 10 ng、Mg2+（20 mmol/L) 2.5 μL、Taq〖KG-*4〗酶1.25 U、dNTPs （10 mmol/L) 1.0 μL、引物（10 μmol/L) 1.5 μL、10×PCR buffer 2.0 μL；应用该SSR体系，在引物筛选试验及山梨ד幸水”后代群体中进行扩增，扩增效果较好，证实了该体系的适用性和稳定性。
- Abstract:
- Genomic DNA of young leaves of Pyrus ussuriensis Maxim was tested as the template,optimization experiments on some important parameters affecting SSR-PCR amplification were conducted to establish an optimum system suitable for SSR-PCR Pyrus ussuriensis Maxim.Orthogonal design was used to optimize SSR anplification system with five factors （including DNA template，Mg2+，Taq polymerase，dNTPs and primer） at five levels，respectively.The results showed that，a suitable SSR-PCR reaction system was established，its total volume was 20 μL，containing 10 ng DNA template，2.5 μL Mg2+（20 mmol/L)，1.25 U Taq polymerase，1.0 μL dNTPs （10 mmol/L)，1.5 μL primer （10 μmol/L) and 2 μL 10×PCR buffer.The reaction system was successfully applied in primer screening experiment and the amplification of the lines from Pyrus ussuriensis MaximבKosui’ using primer CHg04b，and indicated the suitability and stability of the system.
参考文献/References:
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备注/Memo
第一作者简介：李红莲(1986-)，女，硕士，助理研究员，现主要从事秋子梨新品种选育及配套栽培技术等研究工作。E-mail：lhl1129@126.com.责任作者：张茂君(1963-)，男，博士，研究员，现主要从事秋子梨新品种选育及配套栽培技术等研究工作。E-mail：nkyzmj@sina.com. 基金项目：国家现代农业产业技术体系资助项目（CARS-29-06)；国家科技支撑计划资助项目（2013BAD02B01-5）；吉林省科技支撑计划重点资助项目(20130206069NY)；吉林省财政育种专项资助项目；吉林省创新工程资助项目。